c-myc基因反义寡核苷酸对MEC-1细胞超微结构的影响

一、c-myc基因反义寡脱氧核苷酸对MEC-1细胞超微结构的影响（论文文献综述）

高明阳^[1]（2006）在《联合应用反义Bcl-x1和反义Mcl-1寡核苷酸对恶性黑素瘤细胞耐药性影响的研究》文中认为研究背景及目的:恶性黑素瘤是一种最具侵袭性的皮肤肿瘤,其对常规化疗药物的耐药性严重影响其预后。恶性黑素瘤的耐药性可以是其内在固有的,或者在肿瘤治疗中形成的。这种耐药性使肿瘤细胞不仅对用于治疗的化疗药物耐药,而且对其他不同作用机制的药物产生多药耐药。因而逆转肿瘤细胞的耐药性,以提高化疗疗效,是治疗恶性黑素瘤的重要课题。近年来,对凋亡相关分子及其在恶性黑素瘤中变化的认识,为研究恶性黑素瘤耐药的分子基础提供了新依据。因为大多数化疗药物通过诱导细胞凋亡发挥作用,因此肿瘤细胞对凋亡的抵抗可降低细胞对化疗药物的敏感性。现有研究已证实凋亡及其调节因子是决定恶性黑素瘤耐药的重要机制。其中以抗凋亡基因Bcl-2相关蛋白的作用尤为引人注目。Bcl-2基因家族促进凋亡基因和抑制凋亡基因之间的平衡决定细胞存活和凋亡。动物实验研究表明,Bcl-2相关蛋白的变化可显着改变药物敏感性,与恶性黑素瘤耐药有关。越来越多证据表明针对性抑制Bcl-2,可促进细胞凋亡,提高肿瘤细胞对化疗药物的敏感性,从而逆转恶性黑素瘤的耐药性。因而Bcl-2可作为抗肿瘤治疗选择的靶点。反义寡核苷酸是人工合成的DNA序列,通过与特定靶基因的mRNA序列互补结合形成稳定的杂交体,从而抑制特定基因的表达。反义寡核苷酸用于抑制致病基因已取得肯定疗效。近来针对凋亡相关基因的反义核酸基因治疗方法为恶性黑素瘤的治疗提供了新途径,对逆转肿瘤耐药性、延长病人生存期有重要意义。目前针对Bcl-2的反义核酸作为最有希望的反义核酸药物已同化疗药物联合用于恶性黑素瘤Ⅲ期临床实验。Bcl-xl和Mcl-1是Bcl-2基因家族抗凋亡基因,尽管已有报道Bcl-xl

匡新建^[2]（2006）在《c-myc反义寡核苷酸对增生性瘢痕成纤维细胞增殖及P27表达影响的实验研究》文中研究说明研究背景：增生性瘢痕（Hypertrophic scar，HS）是人类皮肤受损、创面愈合后瘢痕持续增生的一种病理现象，它的病理本质是以成纤维细胞（Fibroblast，Fb）为主的细胞成分的过度增殖和以胶原为主的细胞外基质（Extracel lular matrix，ECM）的过度沉积，目前其发病机制还不清楚。瘢痕增生过度挛缩，常常导致各种畸形功能障碍，给患者带来身心痛苦。多年来，瘢痕增生一直无确切的治疗方法。基因治疗是分子生物学的主要应用领域之一，理论上可以从根本上阻止许多疾病的发生与进展，并有望达到治愈的目的，但如何选择靶基因及靶细胞成为其关键。 c-myc是细胞原癌基因，其编码的62KD核蛋白通过与核蛋白Max形成二聚体结合特异的DNA序列（CACTGT）激活许多靶基因的转录，其中很多基因产物与细胞周期调控密切相关。c-myc属于永生性癌基因，在细胞的生长、繁殖、凋亡及分化中具有非常重要的地位。c-myc的过度表达是人类肿瘤细胞最常见的变化之一。近年来国外研究表明c-myc与增生性瘢痕关系密切。国外学者以c-myc反义寡核苷酸（Antisense oligonucleotide，ASODN）转染肿瘤细胞后，分别采用流式细胞术和Western blotting检测的结果均显示，肿瘤细胞c-Myc蛋白水平显着降低。增生性瘢痕形成的早期阶段，通过基因进行干预，是防止瘢痕增生和挛缩的较佳时机。但目前国内外文献尚未见到c-myc ASODN对增生性瘢痕成纤维细胞c-myc mRNA表达影响的报道。国内尚未见到c-myc ASODN处理增生性瘢痕成纤维细胞的类似报道。越来越多的实验证实细胞周期调节蛋白p27对许多肿瘤有抑制作用，因此p27又被称为抑癌基因，是肿瘤抑制性治疗的重要候选者，但其在瘢痕增生过程中的作用尚不清楚。p27蛋白的表达在增生性瘢痕中比正常皮肤组织低，提示p27可能与瘢痕形成有关。研究发现，成纤维细胞高表达c-myc可直接引起p27下调，

孙玲^[3]（2005）在《hTERT及c-myc基因反义寡核苷酸对HL-60细胞的抑制作用》文中提出白血病是血液系统的恶性肿瘤,发病率高,恶性度强,严重影响人们的生活质量。20世纪80年代以来,白血病的治疗取得了较大的进展,大剂量化疗、造血干细胞移植及免疫治疗的联合应用,大大提高了白血病患者的生存率。但大剂量化疗具有严重的毒副作用,造血干细胞移植费用昂贵,且具有移植物抗宿主反应等并发症,限制了其临床广泛应用。因此探索新的有效、简便、毒副作用小的治疗方法,成为血液病基础及临床研究者关注的焦点。 反义技术用于抗白血病的理论基础是根据碱基互补原理,利用反义寡核苷酸片段终止原癌基因和癌基因的表达,使白血病细胞向成熟分化或诱导凋亡,从而起到缓解白血病的作用。已经证实,在髓系白血病细胞株HL-60细胞中,原癌基因c-myc及端粒酶逆转录酶（human telomerase reverse transcriptase, hTERT）基因呈高表达。推测这两种基因可能与白血病的发生发展过程有关。原癌基因c-myc是myc家族的重要成员,其产物属核蛋白类的磷酸化蛋白质,在正常细胞的增殖、分化及凋亡过程中起重要作用。大量研究表明,c-myc基因过度表达与多种肿瘤的发生密切相关。新近有资料显示,c-myc可能参与hTERT和端粒酶的激活。已经证实端粒酶活性增高在恶性肿瘤发病过程中起重要作用。端粒是位于真核细胞染色体末端的保护性结构,端粒酶能合成端粒、补充由细胞分裂造成的端粒缩短,使细胞永生化。hTERT作为端粒酶活性组成部分,在端粒酶的激活过程中具有不可替代的作用。 白血病是多基因、多阶段、多步骤的发生过程,发病机制复杂,单独封闭某一基因的表达,往往不能完全阻止肿瘤的发生。将作用机制不同的两种以上的反

蒋建伟^[4]（2005）在《半乳糖受体介导c-myc反义核酸对肝癌细胞的靶向增效作用》文中进行了进一步梳理目的 探讨半乳糖（galactose, Gal）受体介导的c-myc反义核酸（antisense oligodeoxynucleotide, ASODN）对肝癌细胞的靶向投递作用和对肝癌细胞增殖的高效抑制作用。 方法 1 细胞培养:人肝癌Bel-7402细胞,Raji淋巴瘤细胞,U937淋巴瘤细胞;培养体系:RPMI-1640培养液含10%新生牛血清,100u/mL青霉素、100μg/mL链霉素,置37℃、5%CO2培养箱培养。 2 反义核酸的合成、Gal-PEI-ASODN复合物的制备、离体靶向投递实验: （1） c-myc ASODN的合成:针对c-myc基因序列162～179设计ASODN并进行全程硫代修饰,3′端羧基荧光素FAM修饰或不修饰（上海生物工程公司合成）,序列为:5′-CTT CTC GAG GCA GGA GGG-3′。 （2） 半乳糖-聚乙烯亚胺（polyethyleneimine, PEI）-c-myc反义核酸复合物（Gal-PEI-ASODN复合物）制备:采用无血清RPMI-1640液分别溶解Gal-PEI试剂和c-myc ASODN, 2:1（v/v）混匀,使两者氮磷比为5.0,得Gal-PEI-ASODN复合物。 （3） 离体靶向投递实验:取Bel-7402细胞、U937细胞或Raji细胞,加入荧光标记的ASODN、Gal-PEI-ASODN,孵育不同时间,流式细胞仪检测细胞荧光摄取率及胞内平均荧光强度的差异,相差/荧光显微镜观察荧光标记物进入3种细胞的形态,台盼蓝拒染法检测Gal-PEI-ASODN复合物对3种细胞增殖抑制作用的差异。 3 台盼蓝拒染法、细胞克隆和流式细胞术检测细胞增殖、细胞周期和坏死: 取Bel-7402细胞,加入不同浓度的Gal-PEI试剂,ASODN,Gal-PEI-ASODN,孵育不同时间,台盼蓝拒染法检测药物对细胞增殖的抑制作用,计算药物对细胞增殖的

蒋建伟,张洹^[5]（2004）在《半乳糖受体介导的c-myc反义核酸对人肝癌细胞增殖的抑制作用》文中认为目的 :探讨半乳糖 （Gal） -聚乙烯亚胺 （PEI） -c -myc反义寡核苷酸 （ASODN）交联复合物对人肝癌细胞增殖的影响。方法 :Gal-PEI-ASODN复合物作用于人肝癌Bel- 74 0 2细胞 ,台盼蓝染色法检测不同时间、不同浓度作用下细胞增殖的变化 ,倒置显微镜观察细胞形态 ,流式细胞仪分析细胞亚二倍体的百分率 ,透射电镜观察细胞超微结构的改变。结果 :在 0 - 96h的不同时间点 ,与ASODN组 （含ASODN 2 0 μmol/L）相比 ,Gal-PEI-ASODN复合物 （含ASODN 0 75 μmol/L）明显抑制Bel- 74 0 2细胞的增殖 ,Gal-PEI -ASODN复合物的起效浓度更低 ,起效时间更短 ;不同浓度的单纯ASODN与Bel- 74 0 2细胞作用 72h ,测得ASODN的IC50 为 2 0 9μmol/L ,而在半乳糖受体的介导下 ,ASODN与Bel- 74 0 2细胞作用 4 8h ,测得ASODN的IC50 为 0 2 94 μmol/L ,ASODN的抑制效果提高 70 9倍 ;Gal-PEI -ASODN复合物与Bel- 74 0 2细胞作用 4 8h ,与单纯ASODN组相比 ,细胞亚二倍体百分率更高 ,并且电镜下可见明显的细胞凋亡形态。结论 :半乳糖受体介导的投递系统可明显提高ASODN对Bel- 74 0 2细胞的增殖抑制效应

李兵^[6]（2004）在《bcl-2与c-erbB-2反义寡核苷酸联合转染治疗鼻咽癌的实验研究》文中研究指明目的：观察bcl-2与c-erbB-2基因反义寡核苷酸联合转染对人鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma,NPC）细胞株HNE-1细胞增殖的影响。方法：人工合成并经全硫代磷酸化修饰的bcl-2与c-erbB-2基因反义寡核苷酸（antisense oligodeoxynucleotide，ASODN）与脂质体（lipofectin,Lip）混合制备成复合物处理人鼻咽癌细胞株HNE-1,并把实验分为七组：（Ⅰ）正常对照组、（Ⅱ）c-erbB-2正义寡核苷酸+脂质体组、（Ⅲ）bcl-2正义寡核苷酸+脂质体组、（Ⅳ）c-erbB-2反义寡核苷酸+脂质体组、（Ⅴ）bcl-2反义寡核苷酸+脂质体组、（Ⅵ）bcl-2反义寡核苷酸与c-erbB-2反义寡核苷酸+脂质体（全剂量）联合组和（Ⅶ）bcl-2反义寡核苷酸与c-erbB-2反义寡核苷酸+脂质体（半剂量）联合组。利用流式细胞仪检测各实验组的细胞周期以及bcl-2与c-erbB-2蛋白表达；利用电子显微镜镜观察各实验组细胞形态学改变；利用MTT试验与克隆（集落）形成试验观察各实验组细胞增殖情况。 结果：实验组与对照组比较，S期（DNA合成期）有逐渐延长的趋势，其中bcl-2反义寡核苷酸与c-erbB-2反义寡核苷酸+脂质体（半剂量）联合组最为明显。从细胞形态学观察：反义治疗组观察到线粒体肿胀、凋亡等现象，而bcl-2反义寡核苷酸与c-erbB-2反义寡核苷酸+脂质体（半剂量）联合组最为典型。MTT试验与克隆（集落）形成试验观察到反义治疗组与其它组细胞增殖抑制率有显着差异（p﹤0.05）,而bcl-2反义寡核苷酸与c-erbB-2反义寡核苷酸+脂质体（半剂量）联合组（增殖抑制率达到了90.12%）与其它组细胞增殖抑制率有极显着差异（p﹤0.01）。流式细胞仪检测各实验组的bcl-2与c-erbB-2蛋白表达发现反义治疗组较其它组明显下调，而bcl-2反义寡核苷酸与c-erbB-2反义寡核苷酸+脂质体（半剂量）联合组bcl-2与c-erbB-2蛋白表达与其它组有极显着差异（p﹤0.01）。结论：bcl-2与c-erbB-2基因反义寡核苷酸转染对人鼻咽癌细胞株HNE-1细胞增殖有抑制作用，并能下调bcl-2与c-erbB-2蛋白表达，而联<WP=9>合转染的增殖抑制作用更为明显。关键词：鼻咽癌， 基因， 反义寡核苷酸， 联合转染第二部分目的：观察bcl-2与c-erbB-2基因反义寡核苷酸联合转染对顺铂（cisplatin,DDP）诱导的鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma,NPC）细胞株HNE-1细胞凋亡的影响。 方法：人工合成并经全硫代磷酸化修饰的bcl-2与c-erbB-2基因反义寡核苷酸 （antisense oligodeoxynucleotide，ASODN）与脂质体（lipofectin, Lip）混合制备成复合物处理人鼻咽癌细胞株HNE-1,并把实验分为八组：（Ⅰ）空白对照组、（Ⅱ）脂质体+DDP、（Ⅲ）c-erbB-2正义寡核苷酸+脂质体组+DDP、（Ⅳ）bcl-2正义寡核苷酸+脂质体组+DDP、（Ⅴ）c-erbB-2反义寡核苷酸+脂质体组+DDP、（Ⅵ）bcl-2反义寡核苷酸+脂质体组+DDP、（Ⅶ）bcl-2反义寡核苷酸与c-erbB-2反义寡核苷酸+脂质体（全剂量）联合+DDP组和（Ⅷ）bcl-2反义寡核苷酸与c-erbB-2反义寡核苷酸+脂质体（半剂量）+DDP联合组。利用流式细胞仪检测各实验组bcl-2与c-erbB-2蛋白表达；利用电子显微镜镜观察各实验组细胞形态学改变；利用末端脱氧核苷转移酶（Tdt）介导的脱氧尿苷三磷酸（dUTP）末端标记法（TUNEL）原位观察细胞凋亡，并计算平均凋亡指数（AI）。 结果：流式细胞仪检测各实验组的bcl-2与c-erbB-2蛋白表达发现反义治疗组较其它组明显下调。电子显微镜观察发现反义治疗组出现以下改变：胞浆内脂滴较多，出现髓样结构，线粒体肿胀崩解，溶酶体大量出现；细胞核内染色质边集、可见脂滴、空泡化改变；细胞核的固缩变形，凋亡小体和凋亡细胞清晰典型。TUNEL检测发现：第2、3、4组凋亡指数（AI）无明显差异（p>0.05）, 第58组较14组AI有极显着差异（P<0.01）,其中第8组凋亡指数明显高于其余各组（P<0.01）。结论：bcl-2与c-erbB-2反义寡核苷酸联合转染能促进顺铂诱导的鼻咽癌细胞凋亡，表明鼻咽癌的综合治疗、基因治疗并不排斥其它治疗手段。

赵欣欣^[7]（2004）在《c-myc反义寡脱氧核苷酸治疗类风湿关节炎的研究》文中研究指明前言 类风湿关节炎（rheumatoid arthritis，RA）是一种常见的以关节组织慢性炎症性病变为主要表现的全身性疾病。其主要病理变化特点为持续性反复性关节滑膜炎，炎性细胞浸润，血管翳形成，渐进性软骨、骨组织的破坏。目前的临床治疗手段尚不能达到理想疗效。类风湿滑膜类似于局限性侵袭性生长的肿瘤，RA滑膜成纤维细胞样细胞（B型细胞）和滑膜内血管内皮细胞表达c-myc原癌基因。c-myc原癌基因的表达是细胞增殖的重要标志。c-myc原癌基因是逆转录病毒v-myc癌基因的细胞同系物，表达于多种细胞中，其编码的转录因子在控制细胞增殖、凋亡和分化过程中起重要作用，控制着几种与生长和分化相关基因转录的活化或抑制。其调节异常（如：染色体易位，DNA扩增）在多种人类肿瘤的发生、进展和早期复发中起关键性作用，因此，其成为重要的治疗靶位。 反义核酸技术是一种分子靶向性的治疗方式，它利用反义寡核苷酸在细胞内部与靶mRNA序列特异性结合，干扰其修饰或翻译过程，或通过Hoogsteen氢键结合在靶DNA上，形成局部的三螺旋结构，干扰靶基因的转录。外源性反义寡核苷酸在体内很容易被核酸酶降解，因此作为药物合成的反义寡核苷酸必须进行一定的改性，才能对核酸酶有较强的抵抗，以期在靶位点达到有效浓度，同时又不增加其毒性，目前使用最多的改性方法是对反义寡核苷酸中的磷酸二酯键进行硫代磷酸化修饰。由于反义寡核苷酸是大分子物质，细胞膜对其通透性低，因此必须在载体的帮助下，才能有效进入细胞。脂质体是人工制备的由磷脂双分子定向排列而成的类脂小体，主要成分是天然磷脂和类固醇，具有制备简单、适合生物体内降解、无毒和免疫源性，各种水溶性和脂溶性分子都可以很容易被包入脂质体，十分有利于传递反义核酸，已被美国癌症协会批准为临床基因治疗的首选载体。 已有一项细胞培养研究显示c-myc反义寡脱氧核苷酸（antisense oli-godeoxynucleotides，AS ODN）能诱导人RA滑膜B型细胞凋亡。本研究是在这一基础上进行的深入研究。目的 1.观察硫代磷酸化修饰的c一myc AS ODN在血清存在条件下对培养的RA滑膜B型细胞增殖的影响及诱导凋亡的作用;2.对c一myo mRNA两个不同位点构建c一myc AS ODN进行对照实验，观察它们对队滑膜细胞增殖的抑制作用是否不同，以期能选择出更有效的c一myc反义寡脱氧核昔酸序列;3.了解c.myc AS ODN是否对滑膜中的血管翁形成具有抑制作用，观察c一myo AS ODN对血管内皮细胞系ECV304细胞增殖的影响。通过以上研究初步明确c一myc AS ODN治疗RA的可能性。方法 自一年轻女性活动期RA患者的膝关节液分离滑膜细胞，DMEM培养 液培养，传代纯化出滑膜B型细胞;RPMI 1640培养液培养ECV 304细胞。 构建2条e一mye AS ODN序列，并构建它们的有义序列（sense oligodeoxynu- deotides，5 ODN）作为反义特异性阴性对照。针对翻译起始位点（AUG）的 c一m}rc AS ODN序列为:5‘一AAC GTT GAG GGG CAT一3‘，其5 ODN序列为5‘- ATG CCC CTC AAC GTT一3‘;针对编码区决定子（eoding region determinant， CRD）的c一myc AS ODN序列为:5‘一ATG TAT GCT GTG GCT一3’，其5 ODN 序列为5’一AGC CAC AGC ATA CAT一3‘。在对滑膜B型细胞的研究中ODN 的磷酸二醋键全部进行了硫代磷酸化修饰，而在对ECV304细胞的研究中 ODN的磷酸二醋键只在两端进行了部分硫代磷酸化修饰。ODN以阳离子 脂质体Lipofectin为载体转染细胞。用M件法对细胞的增殖进行检测，用 荧光显微镜观察Hoechst 33258染色法，流式细胞仪检测Annexin一V- FITC和PI法检测细胞凋亡的存在和变化，用流式细胞仪检测细胞内c一myc 蛋白量的变化。结果:针对翻译起始位点（AUG）的c一myo AS ODN（2 .5林moFL一10林moFL） 能显着抑制滑膜B型细胞增殖，在作用24h时此抑制作用就已发生，使细胞 数目减少的最大值为40%（2.5林moFL，48h），相对应的。一myC 5 ODN （10协m0FL一20林moFL）对滑膜B型细胞增殖无显着影响，该c一myc AS ODN（5.0卜moFL）能下调c一myc蛋白表达，诱导滑膜B型细胞凋亡。针对CRD的e一mye AS oDN（1 .25林moFL一10林mol/L）能显着抑制滑膜B型细胞增殖，在作用至48h时此抑制作用才开始起效，使细胞数目减少的最大值为41 .4%（5林mol/L，48h），相对应的e一哪e 5 ODN（10林mol/L）也具有显着的抑制增殖作用。2种序列的c一myc AS ODN在浓度为10林m0FL时抑制细胞增殖的作用均开始下降。 针对翻译起始位点（AUG）的e一哪e AS ODN（ 2.5林moFL一5·o林moFL）能显着抑制ECV304细胞的增殖，这种抑制在。一myo AS ODN作用于细胞12h就已发生，相对应的c一myc 5 ODN（2.5林moFL）也对ECV304细胞增殖产生了相同程度的抑制作用，而5.0卜moFL。一myc 5 ODN有促进ECv304细胞增殖的作用，并且不同程度硫代磷酸化修饰的c一myo 5 ODN均有抑制或促进ECV304细胞增殖的两种作用。c一myc AS ODN和。一myc 5 ODN对ECv304细胞。一myc的表达均无明显改变。结论 硫代磷酸化的c一myc反义寡脱氧核昔酸在一定浓度

任庆兰^[8]（2004）在《c-erbB-2与c-raf-1基因反义寡核苷酸对卵巢癌和宫颈癌放射敏感性影响的实验研究》文中研究说明放射治疗在肿瘤治疗中占有重要地位。据统计，我国大约有70%的恶性肿瘤病人在病程的某一阶段需接受不同方式的放射治疗。在正常组织的耐受剂量范围内，肿瘤的平均治愈率仅为50%。卵巢癌、宫颈癌是严重威胁妇女健康的恶性疾患，直接影响患者的寿命及生存质量，而肿瘤细胞对放射治疗具有一定的放射抵抗性以及由于放疗副反应限制了有效治疗剂量的增加是疗效不佳的重要原因，所以如何降低肿瘤细胞的辐射抗性，增加辐射敏感性一直是放射肿瘤学者研究和关注的课题。第一部分目的：探讨c-erbB-2、c-raf-1基因反义寡核苷酸对受照后人卵巢癌SKOV3细胞增殖的抑制作用及其分子机制。方法：实验分为四组：正常对照组（空白对照组）、Lipofectin组（仅加入等量的脂质体）、正义寡核苷酸治疗组、反义寡核苷酸治疗组。卵巢癌细胞在寡核苷酸处理前后c-raf-1、c-erbB-2表达水平和细胞周期的变化用RT-PCR和FCM检测；接受60Coγ射线不同剂量照射前后肿瘤细胞的存活分数、集落形成率、凋亡情况分别用MTT试验、平板克隆形成试验、电镜、荧光显微镜观察。结果：c-raf-1与c-erbB-2反义寡核苷酸能明显抑制c-raf-1和c-erbB2癌基因的表达，但两者引起的细胞周期阻滞并不一<WP=10>致；反义寡核苷酸作用的卵巢癌细胞经60Coγ射线照射后其细胞存活分数、集落形成率和转染正义寡核苷酸+照射组及单纯照射组比较明显下降、凋亡率明显增加（p<0.01），而转染正义寡核苷酸+照射组与单纯照射组相比无明显差异（p>0.05）。结论：c-raf-1、c-erbB-2 反义寡核苷酸通过下调c-raf-1和c-erbB-2的表达抑制了人卵巢癌细胞株SKOV3的增殖，降低了辐射抗性。该作用可能与c-raf-1、c-erbB-2反义寡核苷酸抑制了引起细胞辐射抵抗的信号转导途径有关，而与改变受照前细胞周期分布关系不明确。第二部分目的：由于Ki-67反映肿瘤细胞的增殖能力，Bcl-2具有抗凋亡的作用，它们的表达程度可用于预测肿瘤细胞的放射疗效（即表达越高，辐射抗性越强），为此第二部分用免疫组织化学法检测与放射敏感性相关的Ki-67、Bcl-2蛋白，观察它们在c-erbB-2/ c-raf-1反义寡核苷酸作用后受照人卵巢癌SKOV3细胞的表达情况。结果：c-erbB-2反义寡核苷酸+照射组Ki-67、Bcl-2免疫组化阳性率分别为19.8%和20.7%（与照射组比较，p﹤0.01）；c-raf-1反义寡核苷酸+照射组两者的免疫组化阳性率分别为19.8%和21.7%（与照射组比较，p﹤0.01）。转染c-erbB-2/ c-raf-1正义寡核苷酸+照射组和照射组比较无明显差异（p>0.05）。结论：，脂质体介导的c-erbB-2/c-raf-1反义寡核苷酸能显着下调经60Coγ射线照射后卵巢癌细胞Ki-67、Bcl-2蛋白的表达。这可能是c-raf-1、c-erbB-2反义寡核苷酸对人卵巢癌细胞株SKOV3放射增敏的分子机制之一。 <WP=11>第三部分目的：体外测定实际上细胞脱离了其生长存在的体内微环境，许多决定其放射生物效应的因素将被改变，如氧合状态、周期分布、相关损伤修复的物理化学条件以及相关于增殖的细胞间接触效应等。临床一个肿瘤病灶的放疗疗效除取决于其本身固有的放射敏感性外，尚受到细胞内外，宿主情况等多种因素的影响，为此建立宫颈癌的皮下移植瘤动物模型，来研究c-erbB-2/c-raf-1基因反义寡核苷酸对小鼠宫颈癌皮下移植瘤放射治疗效应的影响。方法：将Balb/C小鼠随机分为六组：一组：对照组（腹腔注射等量脂质体），二组：腹腔注射正义寡核苷酸，三组：腹腔注射反义寡核苷酸，四组：照射组（腹腔注射等量脂质体），五组：腹腔注射正义寡核苷酸+照射，六组：腹腔注射反义寡核苷酸+照射。用原位杂交检测寡核苷酸作用前后的靶基因表达；通过观察肿瘤受60Coγ射线照射后肿瘤组织体积随时间的变化、肿瘤倍增时间、小鼠存活时间来研究c-erbB-2、c-raf-1基因反义寡核苷酸对小鼠宫颈癌皮下移植瘤放射治疗效应的影响。结果：c-erbB-2/c-raf-1基因反义寡核苷酸能明显抑制相应基因的表达。c-erbB-2/ c-raf-1反义寡核苷酸+照射组的抑瘤率、肿瘤的倍增时间、小鼠的存活时间比照射组明显增加（p﹤0.01），而转染c-erbB-2/ c-raf-1正义寡核苷酸+照射组和照射组比较无明显差异（p>0.05）。结论：c-erbB-2/c-raf-1反义寡核苷酸作用后能使小鼠宫颈癌皮下移植瘤的生长明显受到抑制，小鼠生存期明显延长，提高了放疗疗效。第四部分 <WP=12>目的：由于PCNA表达一定程度上可以反映放疗后肿瘤的增殖情况，而c-Jun、c-Fos能被包括辐射在内的外界刺激激活，导致辐射抗性增加，因此本部分探讨c-erbB-2/c-raf-1反义寡核苷酸对小鼠宫颈癌皮下移植瘤照射前后c-Jun、c-Fos、PCNA表达的影响及其意义。方法：实验分为照射前和照射后各四组。采用免疫组化SABC法检测c-Jun、c-Fos、PCNA表达情况。结果：转染c-erbB-2反义寡核苷酸后受照小鼠宫颈癌皮下移植瘤c-Jun、c-Fos、PCNA的阳性表达率分别为19.76 %、19.47 %、16.49 %（与单纯照射组比较，P<0.01），而转染c-raf-1反义寡核苷酸组的阳性率分别为20.06 %、20.23 %、14.89 %（与单纯照射组比较，P<0.01）。转染c-erbB-2/c-raf-1正义寡核苷酸+照射组各指标与照射组无统计学显着性差异。结论：c-erbB-2、c-raf-1?

杨波^[9]（2004）在《癌泰得联合5-氟尿嘧啶对肝癌生长的抑制作用研究》文中研究表明目的 端粒是真核细胞染色体末端独特的蛋白质-DNA结构，具有保持染色体稳定性和维持细胞正常复制的功能，端粒由端粒酶合成，研究发现在永生化细胞和85%左右的人恶性肿瘤细胞中端粒酶活性呈高表达，端粒酶活性与肿瘤的这种特殊关系，使之在肿瘤的诊断和治疗方面具有重要的应用价值，有望成为癌症诊断和治疗的新靶点。 端粒动力学异常与细胞的衰老和癌变密切相关。对于恶性肿瘤来说，端粒酶是参与肿瘤细胞端粒动力学稳定的关键因素。端粒酶活性下降或缺失将会引起肿瘤细胞的衰亡，但确切机制尚未阐明。基于端粒酶在维持肿瘤细胞生存方面的重要作用，开发靶向端粒酶的抗肿瘤药物成为近年来抗癌药物研究领域里的热点之一。 端粒酶是一种由RNA和蛋白质组成的核蛋白复合体。端粒合成时由端粒酶自身RNA组分作为模板，具有逆转录酶活性的催化亚基的表达是细胞调节端粒酶活性的主要限速步骤，该亚基的表达与端粒酶活性密切相关。由于端粒酶催化亚基结构和功能的特殊性，可以通过针对编码人端粒酶催化亚基基因（hEST2）的反义寡核苷酸来抑制端粒酶活性，从而达到抑制肿瘤生长的目的。 本项目以人端粒酶催化亚基基因hEST2为靶研究抗肿瘤的反义寡核苷酸，旨在开发出靶向端粒酶的用于临床治疗恶性肿瘤的反义核酸药物。经查新检索，国内外尚未见同类研究报道。 我们实验室承担该研究项目的重要部分，负责对筛选出的反义寡核苷酸药物进行体内动物实验药效学研究。本文所报告的研究课题是《癌泰得联合5-氟尿嘧啶对肝癌生长的抑制作用研究》。该课题所应用的材料和方法如下： 实验动物：BALB/C-nu/nu裸小鼠，鼠龄35周，体重1720g,雌雄兼用。瘤株及处理：采用人肝癌裸小鼠原位移植高转移模型；无菌切取移植瘤组织，置入RPMI-1640培养液中，将其剪成1mm×1mm×1mm组织小块，供移植用。药品及试剂：氟尿嘧啶注射液250mg/10ml；癌泰得25mg/支，粉针剂；0.9%生理盐水。 原位移植模型的建立：裸鼠在0.5%戊巴比钠腹腔注射麻醉下取右季肋缘下行斜切口，暴露肝脏，将2粒1mm×1mm×1mm瘤块植入肝左叶被膜或<WP=72>实质内，逐层关腹。分组和给药：术后3天将荷瘤裸鼠分成六组即生理盐水对照组，5-FU10mg/kg组，癌泰得50mg/kg组，癌泰得75mg/kg组，癌泰得75mg/kg联合5-FU10mg/kg组，癌泰得50mg/kg联合5-FU10mg/kg组。每组8只，尾静脉给药，每天1次，连续20天。停药后第3天用颈椎脱位术处死荷瘤裸鼠。 观察项目：（1）移植瘤重和抑瘤率；（2）移植瘤体积；（3）甲胎蛋白浓度；（4）荷瘤裸鼠体重；（5）移植瘤组织学检查。 结果 1、5-FU组的抑瘤率为27.85%，其他各治疗组的抑瘤率均大于30%，在42.14%74.29%之间；各治疗组瘤重与生理盐水对照组瘤重具有显着差异。根据疗效评价标准，说明癌泰得对肝癌生长有显着抑制作用；癌泰得对肝癌的抑制作用有量反应的量一效关系；单用癌泰得对肝癌的抑制作用优于5-FU；癌泰得与5-FU合用优于两药单用，且具有相加或协同作用。 2、各治疗组瘤体积与生理盐水对照组相比均有不同程度缩小；单用癌泰得对肝癌的抑制作用优于5-FU，且具有量反应的量一效关系；癌泰得与5-FU合用优于单用癌泰得或5-FU，且具有相加或协同作用。3、各治疗组AFP浓度较生理盐水对照组均显着降低。瘤体积和AFP浓度之间有直线关系；AFP浓度对瘤体积的直线回归方程为：Y=－127.17+1.10X，回归系数b=1.10（P<0.001）。AFP浓度与瘤体积呈显着正相关（r=0.9977）。 4、各治疗组荷瘤裸鼠体重与生理盐水对照组比较无明显下降，表明单用癌泰得和癌泰得与5-FU合用对实验动物无明显毒副作用。 5、组织学检查：癌泰得和5-FU治疗人肝细胞癌后，肝癌细胞出现不同程度的凋亡、坏死，同时伴有纤维组织增生。 结论 1、本研究首次报道，以人端粒酶催化亚单位基因hEST2为靶的反义寡核苷酸癌泰得与5-FU联合应用具有相加或协同抑制肝癌的作用。进一步证实端粒酶抑制剂与细胞毒化疗药物联合应用具有协同抗肿瘤效应。 2、以人端粒酶催化亚单位基因hEST2为靶的反义寡核苷酸癌泰得对肝癌生长具有抑制作用，抗肝癌疗效呈量反应的量一效关系。癌泰得抑制肝癌的作用优于5-FU。 3、癌泰得具有良好的抑制肝癌作用，单用或与5-FU合用无明显毒性。癌泰得有望成为治疗肝癌的新型生物技术药物。 <WP=73> 4、癌泰得抗肝癌作用的机制是通过抑制肝癌细胞端粒酶活性诱导肝癌细胞凋亡。 5、端粒酶催化亚单位基因hEST2是研究肿瘤药物的潜在靶点。 6、人肝癌裸小鼠原位移植高转移模型是迄今国内外连续传代最长，不仅组织学、超微结构和染色体特点与人肝癌相似，而且分泌AFP的生物学特性一直稳定。移植瘤的生长和转移完整地模拟了人肝癌的临床过程，表现为人肝癌在裸鼠肝内自主的侵袭性生长，肝内、淋巴结、肺和腹腔种植转移。肝癌移植生长率和自发转移率达100%，允许在裸鼠中长期稳定传代，扩增成群体，可在同一时间内获得大量肝癌标本，实验重复性好，该模型是一种最接近人和稳定的实验模型。由于该模型药物动力学更接近于人原发瘤，更适用于抗肿瘤新药的筛?

赵欣欣,赵丽娟,肖卫国,鲁静,杨聘婷,于清宏^[10]（2004）在《C-myc反义寡脱氧核苷酸抑制类风湿滑膜细胞增生诱导滑膜细胞凋亡》文中认为目的研究硫代磷酸化修饰的c-myc反义寡脱氧核苷酸（antisense phosphorothioate oligodeoxynucleotides ,AS P-ODN）在血清存在条件下对培养的人类风湿关节炎（rheumatoid arthritis, RA）滑膜B型细胞增生的影响及诱导凋亡的作用。方法培养RA滑膜B型细胞,合成c-myc AS P-ODN,以阳离子脂质体lipofectin为载体转染滑膜B型细胞,用显微镜观察和四唑盐（MTT）法检测对细胞增生的抑制作用,用荧光染色、荧光显微镜、流式细胞仪检测诱导细胞凋亡和c-myc蛋白表达的变化。结果c-myc AS P-ODN呈序列特异性抑制滑膜B型细胞增生并下调c-myc蛋白表达,诱导滑膜B型细胞凋亡。结论c-myc AS P-ODN可能对RA的滑膜增生性炎症具有潜在的治疗作用,c-myc原癌基因可能成为反义核酸技术治疗RA的靶基因。

二、c-myc基因反义寡脱氧核苷酸对MEC-1细胞超微结构的影响（论文开题报告）

（1）论文研究背景及目的

此处内容要求：

首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。

写法范例：

本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。

（2）本文研究方法

调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。

观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。

实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。

文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。

实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。

定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。

定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。

跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。

功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。

模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。

三、c-myc基因反义寡脱氧核苷酸对MEC-1细胞超微结构的影响（论文提纲范文）

（1）联合应用反义Bcl-x1和反义Mcl-1寡核苷酸对恶性黑素瘤细胞耐药性影响的研究（论文提纲范文）

（2）c-myc反义寡核苷酸对增生性瘢痕成纤维细胞增殖及P27表达影响的实验研究（论文提纲范文）

（3）hTERT及c-myc基因反义寡核苷酸对HL-60细胞的抑制作用（论文提纲范文）

（4）半乳糖受体介导c-myc反义核酸对肝癌细胞的靶向增效作用（论文提纲范文）

（5）半乳糖受体介导的c-myc反义核酸对人肝癌细胞增殖的抑制作用（论文提纲范文）

（6）bcl-2与c-erbB-2反义寡核苷酸联合转染治疗鼻咽癌的实验研究（论文提纲范文）

（7）c-myc反义寡脱氧核苷酸治疗类风湿关节炎的研究（论文提纲范文）

（8）c-erbB-2与c-raf-1基因反义寡核苷酸对卵巢癌和宫颈癌放射敏感性影响的实验研究（论文提纲范文）

（9）癌泰得联合5-氟尿嘧啶对肝癌生长的抑制作用研究（论文提纲范文）

四、c-myc基因反义寡脱氧核苷酸对MEC-1细胞超微结构的影响（论文参考文献）

• [1]联合应用反义Bcl-x1和反义Mcl-1寡核苷酸对恶性黑素瘤细胞耐药性影响的研究[D]. 高明阳. 大连医科大学, 2006(11)
• [2]c-myc反义寡核苷酸对增生性瘢痕成纤维细胞增殖及P27表达影响的实验研究[D]. 匡新建. 南昌大学, 2006(02)
• [3]hTERT及c-myc基因反义寡核苷酸对HL-60细胞的抑制作用[D]. 孙玲. 郑州大学, 2005(08)
• [4]半乳糖受体介导c-myc反义核酸对肝癌细胞的靶向增效作用[D]. 蒋建伟. 暨南大学, 2005(08)
• [5]半乳糖受体介导的c-myc反义核酸对人肝癌细胞增殖的抑制作用[J]. 蒋建伟,张洹. 中国病理生理杂志, 2004(11)
• [6]bcl-2与c-erbB-2反义寡核苷酸联合转染治疗鼻咽癌的实验研究[D]. 李兵. 重庆医科大学, 2004(03)
• [7]c-myc反义寡脱氧核苷酸治疗类风湿关节炎的研究[D]. 赵欣欣. 中国医科大学, 2004(03)
• [8]c-erbB-2与c-raf-1基因反义寡核苷酸对卵巢癌和宫颈癌放射敏感性影响的实验研究[D]. 任庆兰. 重庆医科大学, 2004(03)
• [9]癌泰得联合5-氟尿嘧啶对肝癌生长的抑制作用研究[D]. 杨波. 吉林大学, 2004(04)
• [10]C-myc反义寡脱氧核苷酸抑制类风湿滑膜细胞增生诱导滑膜细胞凋亡[J]. 赵欣欣,赵丽娟,肖卫国,鲁静,杨聘婷,于清宏. 中华风湿病学杂志, 2004(02)

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